尖锐湿疣都能在哪里
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(二)PCR扩增
1、 引物设计和合成:HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L),每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1,该引物与HPV 6、11、16、18及33型有互补序列,也可扩增其它型HPV。
尖锐湿疣都有哪些症状2、PCR反应试剂:Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/L dNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),100μmol/L MY11和MY09贮备液,灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
3、PCR扩增方法和程序:以100μl PCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
尖锐湿疣都注意哪些(1)实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。
(2)各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
(3)加入80-100μl石蜡油,在台式离心机上快速离心数秒钟,使各反应试剂收集于油层下。目前,PCR试剂已商品化,反应体积为25μl。使用时只加入标本DNA即可。
(二)PCR扩增
1、 引物设计和合成:HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L),每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1,该引物与HPV 6、11、16、18及33型有互补序列,也可扩增其它型HPV。
尖锐湿疣都有哪些症状2、PCR反应试剂:Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/L dNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),100μmol/L MY11和MY09贮备液,灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
3、PCR扩增方法和程序:以100μl PCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
尖锐湿疣都注意哪些(1)实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。
(2)各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
(3)加入80-100μl石蜡油,在台式离心机上快速离心数秒钟,使各反应试剂收集于油层下。目前,PCR试剂已商品化,反应体积为25μl。使用时只加入标本DNA即可。
- 参考资料